선박평형수 처리장치 효율 검증을 위한 해양미소부유생물 생사판별법

Abstract

본 연구는 해양에서 자연 상태의 동·식물플랑크톤의 군집을 대상으로 Evan blue, Aniline blue 그리고 CMFDA의 염색방법을 적용하여 생물생사판별이 가능한지 여부를 평가함과 아울러, 가장 적절한 염색농도범위를 파악하기 위해서 농도구배 및 교차 염색법(FDA+CMFDA)으로 가장 효율적인 평가방법을 모색하고자 노력하였다. Evans blue농도별로 염색한 결과, 가장 낮은 1 &micro L의 Evans blue working solution을 주입한 실험구에서는 염색반응이 일어나지 않았고, 동일하게 살아있는 생물에도 염색이 나타나지 않은 것으로 보아 극히 낮은 농도에서는 생사판별이 불가능하다는 것을 알 수 있었다. 또한, Evans blue working solution의 농도가 10-50 &micro L에서는 살아있는 동물플랑크톤 시료에 대해 전체 개체수의 10% 미만이 염색율을 나타내었고, 100 &micro L 이상의 농도에서는 높은 염색농도의 영향으로 바탕(background) 전체가 파란색으로 보여 생물의 염색정도를 명확하게 판단할 수 없었다. Aniline blue염색법 또한 Evans blue와 유사하게 죽은 세포를 파란색으로 염색하여 생물의 사멸여부를 구분한다. Evans blue와 유사하게 Aniline blue 1 &micro L 농도에서는 염색반응이 나타나지 않았다. Aniline blue 10-20 &micro L 의 농도에서는 전체 개체수 90% 이상의 염색율을 나타냈으나, 염색되는 정도가 명확하지 않았고, 종별로 염색반응이 다르게 나타났다. CMFDA 염색의 최종농도 1 &micro M에서 전체 식물플랑크톤의 군집의 53.3% 염색효율을 보였고, 5 &micro M에서는 72.1%로 높게 나타났다. FDA와 CMFDA를 농도별로 중복염색(double staining)하여 염색효율을 알아본 결과, FDA를 25 &micro L 과 CMFDA를 10 &micro l FDA+CMFDA)으로 가장 효율적인 평가방법을 모색하고자 노력하였다. Evans blue농도별로 염색한 결과, 가장 낮은 1 &micro L의 Evans blue working solution을 주입한 실험구에서는 염색반응이 일어나지 않았고, 동일하게 살아있는 생물에도 염색이 나타나지 않은 것으로 보아 극히 낮은 농도에서는 생사판별이 불가능하다는 것을 알 수 있었다. 또한, Evans blue working solution의 농도가 10-50 &micro L에서는 살아있는 동물플랑크톤 시료에 대해 전체 개체수의 10% 미만이 염색율을 나타내었고, 100 &micro L 이상의 농도에서는 높은 염색농도의 영향으로 바탕(background) 전체가 파란색으로 보여 생물의 염색정도를 명확하게 판단할 수 없었다. Aniline blue염색법 또한 Evans blue와 유사하게 죽은 세포를 파란색으로 염색하여 생물의 사멸여부를 구분한다. Evans blue와 유사하게 Aniline blue 1 &micro L 농도에서는 염색반응이 나타나지 않았다. Aniline blue 10-20 &micro L 의 농도에서는 전체 개체수 90% 이상의 염색율을 나타냈으나, 염색되는 정도가 명확하지 않았고, 종별로 염색반응이 다르게 나타났다. CMFDA 염색의 최종농도 1 &micro M에서 전체 식물플랑크톤의 군집의 53.3% 염색효율을 보였고, 5 &micro M에서는 72.1%로 높게 나타났다. FDA와 CMFDA를 농도별로 중복염색(double staining)하여 염색효율을 알아본 결과, FDA를 25 &micro L 과 CMFDA를 10 &micro l